血管内皮细胞的分离和培养

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

将胶原蛋 A 酶液注入血管腔后孵育，从而分离内皮细胞。在涂有明胶的底物上用合适培养液培养时，内皮细胞呈几倍增殖。免疫磁珠分离法用于从已分散的心脏组织分离内皮组织。

来源：丁香实验

操作方法

分离人脐静脉内皮细胞（HUVECs）

内皮细胞的分离 1. 用铝箔覆盖软木板。 2. 将棉纸铺在铝箔上面，然后用 70 % 乙醇浸泡。 3. 挤出脐带中的血液。 4. 切除脐带一端 2 cm 或 2 cm 以上，包括动脉夹痕迹处。 5. 将 Luer 接合管外套插入静脉。 6. 用针将脐带钉在软木板上，但注意勿穿经血管腔。 7. 用手术刀和手术镊剥出一段静脉，长约 2 cm。 8. 缝线固定接合管，紧紧打结两次。

分离牛主动脉内皮细胞（PAECs)

1. 将铝箔铺在软木板上。 2. 将主动脉（新鲜猪主动脉：如条件允许，需无菌取材。放入 HBSS/PSGA 中转运）放于 70 % 乙醇浸泡的棉纸上面，然后轻拍动脉以吸干表面的液体。 3. 在铝箔覆盖的软木板上，修剪主动脉周围组织，只保留分支。不要将分支剪得过短。 4. 用线结扎分支，夹住主动脉细端。 5. 注入 D-PBSA，将主动脉充满，然后夹住主动脉上端。 6. 用无菌鳄鱼夹将漏液

分离小鼠心脏内皮细胞（MCECs)

1. 将心脏放入盛有约 5 ml HBSS/PS（HBSS，添加 150 U/ml 青霉素和 150 μg/ml 链霉素）的 Petri 培养皿。 2. 除去主动脉和肺动脉等与心脏相连的血管。 3. 将心脏（小鼠心脏：放入含有 300 U/ml 青霉素和链霉素混合液、50 μg/ml 庆大霉素的 HBSS/PSG）切成两半，取出较大的血块和掉落的结缔组织。 4. 将心脏放入盛有 CMF （

分离人心脏内皮细胞（HCEC)

1. 按分离小鼠心脏内皮细胞的步骤操作。 2. 在步骤 7 用 Ⅱ 型胶原蛋白酶（1 mg/ml）消化组织。 3. 按照方案23.28C 的步骤 20，用包被人 MHC-Ⅱ 类抗原或 CD31 抗体的磁珠分选内皮细胞。然后，从方案23. 28C 的步骤 23 继续操作。 4. 用 HCEC 生长培养液（含有 4 mmol/L L-谷氨酰胺的 M199，添加 10 % FBS、10 % 人男性