原理
根据 McDouall 等 [ 1996 ] 的方法可以分离人的 CEC。
材料与仪器
Ⅱ型胶原蛋白酶
HCEC生长培养液
磁珠
HCEC生长培养液
磁珠
步骤
1. 按分离小鼠心脏内皮细胞的步骤操作。
2. 在步骤 7 用 Ⅱ 型胶原蛋白酶(1 mg/ml)消化组织。
3. 按照方案23.28C 的步骤 20,用包被人 MHC-Ⅱ 类抗原或 CD31 抗体的磁珠分选内皮细胞。然后,从方案23. 28C 的步骤 23 继续操作。
4. 用 HCEC 生长培养液(含有 4 mmol/L L-谷氨酰胺的 M199,添加 10 % FBS、10 % 人男性 AB 血清(Sigma)、150 U/ml 青霉素、150 μg/ml 链霉素和 ECGS )维持培养 HCEC 。
2. 在步骤 7 用 Ⅱ 型胶原蛋白酶(1 mg/ml)消化组织。
3. 按照方案23.28C 的步骤 20,用包被人 MHC-Ⅱ 类抗原或 CD31 抗体的磁珠分选内皮细胞。然后,从方案23. 28C 的步骤 23 继续操作。
4. 用 HCEC 生长培养液(含有 4 mmol/L L-谷氨酰胺的 M199,添加 10 % FBS、10 % 人男性 AB 血清(Sigma)、150 U/ml 青霉素、150 μg/ml 链霉素和 ECGS )维持培养 HCEC 。
来源:丁香实验