人或动物脑毛细血管原代内皮细胞的分离

实验材料：

1. 人或动物的脑部毛细血管

2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml

3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml胶原酶

4. 250g/L BSA

5. 眼科剪，眼科镊

6. 60μm尼龙筛、150μm尼龙筛和230μm尼龙筛

7. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 麻醉动物后取其脑组织，将脑组织放入盛有PBS的容器内，去除脑膜和表面血管，取皮质灰质，用匀浆机将其制成匀浆。

2. 用10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml胶原酶溶液，37℃，消化脑组织1h。吸去上清，将沉淀悬浮于250g/L BSA的PBS中，4000r/min离心10min，去除悬浮的脂肪细胞碎片和髓磷脂。

3. 将沉淀物重新悬浮于上述消化液中，37℃消化1-3h。消化产物先过230μm尼龙筛，再过150μm尼龙筛，以去除大血管、细胞碎片等。

4. 收集微血管。将滤过液通过60μm尼龙筛，以便收集微血管内皮细胞。将筛子倒转，用培养液将微血管内皮细胞冲洗至平皿中。