传代细胞培养

一、贴壁细胞：HeLa细胞的传代培养1. 选取生长密度80%左右的HeLa细胞，在生物安全柜中操作，吸去培养皿中的旧培养基，加入2 mL的D-Hanks溶液，漂洗细胞以除去残留的血清。2. 吸去培养皿中的D-Hanks溶液，加入2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液，于37℃消化2～3 min(如消化程度不够，可延长时间)，倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆时，轻轻吸去酶消化液（如果有较多细胞漂起

人肾小管上皮细胞 HK-2 属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入 HPV-16 E6/E7 基因而获得永生化。

人肾小管上皮细胞 HK-2 属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入 HPV-16 E6/E7 基因而获得永生化。

第 0 天：T 细胞培养和活化 使用前将足够体积的 PRIME-XV T Cell CDM 预热至 37˚C 至少 15 分钟。注：为避免温度循环，请在预热前确定所需的总体积。 将冻存管在 37˚C 水浴中轻轻搅拌解冻 1 分钟。或者使用新分离或收获的细胞。 小心地将冻存管中的细胞全部转移到装有 10 mL PRIME-XV T Cell CDM 的 15 mL 锥形管中。 将细胞以 300 g

活化和扩增培养基的制备1. 通过添加以下推荐浓度的细胞因子：500 IU/mL 的重组人 IL-2 (rhIL-2)、10 ng/mL 的 rhIL-12、10 ng/mL 的 rhIL-18 和 10 ng/mL 的 rhIL-21，为每 1x106 个富集的 NK 细胞制备 1 mL 的接种培养基（PRIME-XV NK Cell CDM）。2. 通过将步骤 1 中细胞因子的相对浓度翻倍，为每

以下方案经过优化，可用于在 2D 培养容器中扩增来自脂肪、骨髓和脐带的人类间充质干细胞（hMSCs）。 包被程序 注意：要在 PRIME-XV MSC Expansion XSFM 中培养 MSCs，组织培养板或培养瓶必须预先涂上细胞附着基质。强烈建议使用 Cellnest（FISI，货号1063967）涂覆培养表面以保持一致性。也可使用其他类型的基质（PRIME-XV 人类纤连蛋白，FISI

完全培养基的制备 本文概述两步法，在 8 天内进行 3 次补料。第 0 天和第 3 天的前两次补料需要使用分化培养基，而第 6 天的第三次补料需要使用完全培养基，其细节概述如下。注意：请在每次补料的当天制作新鲜的相应培养基。 制备分化培养基时，在锥形管中加入适量的 PRIME-XV Dendritic Cell Maturation CDM，并补充 GM-CSF（400 IU/ml）和 IL-