传代细胞培养与观察
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实验原理
传代培养是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。
这种培养,第一步也是制备细胞悬液,当细胞长成致密单层时,它很容易被蛋白水解酶和EDTA)所破坏。所以—般采用胰蛋白酶和EDTA(乙二胺四乙酸盐)的混合物,做为消化液。
实验试剂
实验设备
此外,还有显微镜、血细胞计数器、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球、碘酒棉球、试管架、标记笔、解剖板等。
实验材料
实验步骤
在做传代细胞培养之前,首先将培养瓶置于显微镜下,观察培养瓶中细胞是否已长成致密单层,如已长成单层,即可进行细胞的传代培养。
分装好的细胞瓶上,做好标志,注明细胞代号、日期。置于培养架上,轻摇使细胞均匀分布,以免堆积成团。然后置于37℃培养。
a. 首先要观察培养细胞是否污染。主要观察培养液颜色的变化及混浊度
c. 如细胞已生长,则要观察细胞的形态特征并判断其所处的生长阶段。观察时可参照2)的描述进行。
d. 观察完毕,可用台盘蓝染液对细胞进行染色。以确定死、活细胞的比例。
a. 游离期:当细胞经消化分散成单个细胞后,由于细胞原生质的收缩相表面张力以及细胞膜的弹性。所以,此时细胞多为圆形,折光率高,此期可延续数h。
十:细胞占瓶壁有效面积(也就是细胞能生长的瓶壁面积)的25%以内有新生细胞。一般要观察3—5个视野内的细胞生长状况,然后加以综合分析判断。
十十十:细胞占瓶壁有效面积的75—95%具新生细胞。细胞排列致密。但仍有空隙。