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朊粒病的实验室检测

实验分类:

微生物实验

最新修订时间:

简介

肮粒病的临床诊断可根据流行病学特征、临床表现、病理学检查、生物标记物蛋白以及基因检测等进行判断。但肮粒病的确诊离不开病原学检查, 目前主要通过免疫组织化学法 (immunohistochemistry , IHC)。 免疫印迹法 (Western blot , WB)检测脑组织中 PrP。由于目前尚缺少可区分 PrP 和 PrP 的特异性抗体, 根据 PrP 对蛋白酶 K 消化耐受, 而 PHP 易被蛋白酶 K 消化的理化特性,PrP」的常规鉴定需要用蛋白酶 K 将 PrP 消化殆尽, 然后通过酶联免疫吸附、免疫印迹等技术, 用广谱 PrP 单抗(Pananti-PrP McAb)来检测保留下来的具有蛋白酶抗性的 PrP~。

原理

朊粒病的主要检测方法包括利用电镜直接观察羊痒病相关纤维;通过免疫学方法检测 Prp-5 和生物标志物;利用分子生物学方法检查 PrP 基因的多态性和突变;通过动物接种实验用千判断感染因子的传染性、致病性等。

来源:丁香实验团队

操作方法

朊粒病的标本类型和处理

肮粒(Prion,PrPS )又名脉病毒、肮毒体, 是一类由宿主细胞基因编码, 构象异常的蛋白,其不含核酸, 抵抗力强, 具有自我复制能力和传染性, 可引起多种哺乳动物发生传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs), 如羊瘙痒病、克雅病、库鲁病、疯牛病等。目前在人类及20余种动物中发现有10多种自然发生或感染的玩粒病。

朊粒病的电镜检查羊痒病相关纤维(SAF)

肮粒(Prion,PrPS )又名脉病毒、肮毒体, 是一类由宿主细胞基因编码, 构象异常的蛋白,其不含核酸, 抵抗力强, 具有自我复制能力和传染性, 可引起多种哺乳动物发生传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs), 如羊瘙痒病、克雅病、库鲁病、疯牛病等。目前在人类及 20 余种动物中发现有 10 多种自然发生或感染的玩粒病。

朊粒病的免疫学方法检测 PrPSc

肮粒(Prion,PrPS)又名脉病毒、肮毒体, 是一类由宿主细胞基因编码, 构象异常的蛋白,其不含核酸, 抵抗力强, 具有自我复制能力和传染性, 可引起多种哺乳动物发生传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs), 如羊瘙痒病、克雅病、库鲁病、疯牛病等。目前在人类及 20 余种动物中发现有 10 多种自然发生或感染的玩粒病。

朊粒病的基因检测

基因诊断作为一项发病前诊断技术, 对早期干预治疗具有重要意义。由于基因诊断的前提是要有家族史, 所以对 sCJD 和 vCJD 等意义不大。而对于由 PrP 基因发生特定区域或位点突变引起的遗传性 CJD, 如家族性 CJD、FFI、GSS 等, 找出血液样本中 PrP 基因的异常, 是其重要诊断依据。

朊粒病的生物标志物的检测

与诊断标记物 PrP 检测不同的是, 此类生物标记物随病理过程的发展而变化, 其优势在于预测风险, 这就要求高灵敏度的而非高特异性的指标。这些生物标记物包括 14-3-3 蛋白。S100 钙结合蛋白等。这些蛋白质在 sCJD 患者脑脊液中含量增高, 代表了中枢神经系统损伤和神经元死亡的情况。

朊粒病的动物接种实验和细胞接种实验

动物接种实验用于判断感染因子的传染性, 致病性, 目前仍然是检查 TSEs 传染性和致病性的金标准。这种方法是将通过倍比稀释的感染因子接种易感动物, 观察实验动物的发病情况。

朊粒病的蛋白质错误折叠循环扩增技术

蛋白质错误折叠循环扩增技术将待测样品与大量 PrP 共同孵育, 样品中微量的 PrPSc 可作为模板, 促使正常的 PrP 错误折叠转变为聚集性的 PrP, 并最终使标本中的 PrP 含量大幅度增加, 经过蛋白酶消化后, 再用 WB 等方法检测蛋白酶抗性的 PrP。

朊粒病的毛细管电泳技术

目前传统方法难以用于血清中 Pr 的检测, 而毛细管电泳作为一种高效分离检测技术, 已在血清中 Pr 的检测表现出可行性。

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