激酶信号级联放大的流式细胞分析实验

流式细胞仪通常利用表型分析对细胞群进行分析与鉴定，或对细胞分析相关的项目进行检测，如细胞毒活性、细胞活力及凋亡等。对于利用流式细胞仪来评价或分析复杂细胞群体，如外周血中的细胞亚群是很方便的。在当前蛋白组学分析中, 二维的 SDS-PAGE 凝胶电泳和蛋白翻译后修饰的质谱分析主要是对胞内活化过程进行分析。但是，这些实验的示值读数显示的是细胞被溶解后所有细胞蛋白活化的均值，并不能对细胞群体中单细胞蛋白活化的信息分布进行分析，也不能对活 化蛋白水平进行相应细胞类型的回溯性分析，因而该类方法可能会掩蔽一些生物学信息。如用此 类需要溶解细胞来进行蛋白分析的方法，对人或鼠免疫细胞这类高变异细胞群进行分析时, 免疫细 胞中特定细胞群或在不同细胞亚群间的有意义信息就会被丢失。最后，蛋白活化信号的级联活化 尽量要在其相应的生理状态中进行检测，以避免人为因素的干扰。因此，只有发展对包括单细胞内激酶活性检测在内的胞内生化多参数检测方法，才能对复 杂的异质性群体中特定淋巴细胞亚群的个别生化活动进行分析。多参数流式细胞仪分析可根 据其细胞表型的差异，对不同的细胞亚群、不同细胞分化及活化状态的小细胞群进行分析。目前，用于激酶信号级联放大的流式细胞分析实验的方法主要有 4 种：磷酸单标记、表面分子+胞内分子标记（甲醇再水化法）、表面分子+胞内标记（皂素法）和胞内磷酸化蛋白、胞内因子及表面分子联合标记。