McAb 亲和力的鉴定实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

抗体亲和力是指抗体与抗原或半抗原结合的牢固程度。亲和力一般以亲和常数 K 表示，K 的单位是 L/mol，通常 K 的数值范围在 10-10^1°L/mol，也有的可高达 10⁴L/mol。在 McAb 特性鉴定中，亲和力的测定也是十分重要的，它可为正确选择不同用途的 McAb 提供依据。

如在免疫学测定及建立各种检测方法时，应选用亲和力高的 McAb，以提高检测方法的敏感性和特异性，并可节省试剂；但在亲和层析中作为免疫吸附剂时，则应选用亲和力适中的 McAb，因亲和力过低不易吸附，亲和力过高又不易洗脱。

目前，用于测定 McAb 亲和力的方法主要有 2 种：竞争 ELISA 法测定 McAb 亲和常数和间接 ELISA 法测定 McAb 相对亲和力。

原理

McAb 亲和力的鉴定实验的基本原理是抗体亲和力指抗体与抗原或半抗原结合的牢固程度，其高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇（表位）之间立体构象的合适程度决定的。在 McAb 特性鉴定中，亲和力的测定也是十分重要的，它可为正确选择不同用途的 McAb 提供依据。

来源：丁香实验团队

操作方法

竞争 ELISA 法是一种简便易行的亲和力测定方法。

间接 ELISA 法较前述竞争性 ELISA 有所改进，可直接采用杂交瘤细胞培养上清进行测定，无需纯化抗体，无需对抗原精确定量，无需计算 K 值，特别适宜于针对同一抗原的多株不同 McAb 之间亲和力差别的比较。