酶联免疫斑点实验 (ELIspot)
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简介
从单细胞水平观察分泌蛋白的表达已成为目前研究细胞功能的重要内容，酶联免疫斑点法(ELISpot)技术巧妙地运用了酶联免疫吸附技术，从方法上解决了该难题，已广泛运用于各项重要课题研究中。ELISpot最初用于检测分泌抗原特异性抗体的个体B细胞，以后该方法不断改进，用于检测分泌特定抗原的单个细胞。
来源：丁香实验
操作方法
一、包被96孔板 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。（如果暂时不用，可将96孔板干燥后4保存，可保存2周以上） 二、细胞刺激和细胞因子捕获
酶联免疫斑点实验(ELIspot)一、ELISPOT包被 1. 设计好实验，把每个孔要加入的内容做成卡片，到时候就会从容很多。 2. 每孔加入15 μL 70%的乙醇预湿30秒。 3. 加入100 μL去离子水洗涤三次，尽量减少乙醇的残留。 4. 按照试剂盒的使用说明，将包被抗体储存液稀释在PBS缓冲液中，每孔加入50 μL，4°C包被过夜。 5. （次日）倾倒包被液，用PBS洗涤5次，
PVDF Eli-spot法一、试剂盒内容 PVDF96孔板，室温保存；0.1 ml捕获抗体，4℃保存；0.1 ml生物素标记检测抗体，4℃保存；15 ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存；0.25 g牛血清白蛋白，4℃保存；0.25 g脱脂乳，4℃保存；11 ml底物缓冲液，4℃保存；11 ml浓缩PBS（10X），室温保存；11 ml浓缩洗涤液（200x），室温保存。 二、试剂的准备 1. 10 m
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