蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验
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简介
蛋白质化学家测定蛋白质分子的共价结构不仅有利于深人研究蛋白质的三维结构，而且有利于我们进一步理解蛋白质分子的结构-功能的相互关系。
[澳] 理查德 J. 辛普森 (Richard J.Simpson) 主编 何大澄 主译
来源：丁香实验
操作方法
一、浸润层析柱 1.将准备好的两相柱的亲水段（凸向接头）移开，放在一边。 2.将柱的疏水段（凹向接头）和上样漏斗装配在一起。 3.向下按压上样漏斗并且顺时针旋转，将上样漏斗和柱的疏水段装人样品上样室中。 4.将 1ml HPLC 级的甲醇充满上样漏斗。 5.旋紧上样器的螺旋盖。 6.打开氮气（80psi) 维持足够时间，使上样漏斗变空，但应
方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验要点：为了避免凝胶或膜的蛋白质污染，进行以下操作时需戴手套。 1.凝胶电泳之后，立即将凝胶转移到一个塑料容器中。 凝胶在电印迹之前不能进行染色，因为接触甲醇/乙酸会使蛋白质固定在聚丙烯酰胺凝胶上，会大大降低从凝胶电转移到膜上的蛋白量。 2.加入足以浸没凝胶的转移缓冲液，在室温放置 5~lOmin。 3.根据凝胶大小剪一块 PVDF 膜，用 10
方案3 检测 PVDF 膜上的蛋白质实验1.依方案2 电转移后，将 PVDF膜迅速放于塑料容器中，并加人考马斯亮蓝染色液浸没膜。室温下染 5〜10 min 。 2.弃去染色液，加人脱色液浸没膜，在 PVDF 膜完全脱色后换液。大约共需换 3〜4 次脱色液，共脱色 30min 到 1 h 。 3.用水洗 PVDF 膜约 5〜10 min 。 4.重复洗膜 5 次以上。
方案4 浓缩聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质点实验1.切下二维凝胶目的蛋白点，每个点分别放置于 10 ml 的聚丙烯管，用 9 ml 水重新水化。 注意不要将这些蛋白点搞混。从不同的凝胶上获得的相同的蛋白点可以在一个聚丙烯管中处理。 2.用 9 ml 水洗涤重新水化的胶块，共洗 5 次，每一次约 5 min。 3.弃去最后一次洗涤的水，加人平衡缓冲液以浸没胶块，室温下平衡胶块 lh。 4.向巴
方案5 磷酸化多肽的固相微量测序实验1.将放射性标记的肽段在小试管中溶解于 20ul 适当的溶剂中（如含或不含 0.1%TFA 的 30% 乙腈水溶液，可能会将多肽从 RP-HPLC 柱上洗脱下来）。加热混合物至 55°C，直至溶解。 2.用契仑科夫法在闪烁计数器中计数（注音：契仑科夫计数时不加闪烁液）。 3.将 Sequelon-AA 盘从试剂盒中取出，放置于 55°C 的聚醋薄膜上。 4.滴加放
方案6 羧基端序列分析实验一、将蛋白质转移到 PVDF 膜上 步骤1 利用电印迹法或从溶液中直接吸收（利用 ProSorb 样品制备容器），向 PVDF 膜转移 50?IOOpmol 的蛋白质样品。具体如下。 对于蛋白质电印迹到 PVDF 膜： 1.将凝胶中分离的蛋白质电转移到一张 PVDF 膜上（见方案 2 和 Mozdzanowski,et al,1992)。 2.用考马斯亮蓝
