方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验

要点：为了避免凝胶或膜的蛋白质污染，进行以下操作时需戴手套。

1.凝胶电泳之后，立即将凝胶转移到一个塑料容器中。

凝胶在电印迹之前不能进行染色，因为接触甲醇/乙酸会使蛋白质固定在聚丙烯酰胺凝胶上，会大大降低从凝胶电转移到膜上的蛋白量。

2.加入足以浸没凝胶的转移缓冲液，在室温放置 5~lOmin。

3.根据凝胶大小剪一块 PVDF 膜，用 100% 甲醇润湿后迅速转移到一个内有转移缓冲液的塑料容器中，在室温下浸泡膜 5 min。

4.将凝胶和膜都从转移缓冲液中取出，按照仪器要求组装到电印迹装置里。

5.凝胶在 4°C 条件下，500mA 电转移 3 h。注意参照仪器所要求的特殊条件。例如，对一些仪器的特殊要求如下：

若使用 Mini Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad):90~100V 转移 Ih 或 30V 保持过夜。

若使用 Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad): 转移时间依赖于凝胶浓度和膜的大小，可以从 30 min~4 h。在 4℃时，如使用 Gly-Tris 缓冲液，100V 对应的电流约 360mA，150V 对应的电流约 550mA，200V 对应的电流约 850mA。

6.按方案 3 检测膜上的蛋白质。