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简介
常规的 PCR 扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐, 耗时较长,同时在反复的操作中 DNA 量损失也较大,产率较低。在 1989 年 Gussow Clackson 建立了菌落 PCR (colony PCR) 法,菌落 PCR 与我们通常的普通 DNA 的 PCR 的不同在于,直 接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落,操作简单、快速,在转化鉴定中较常用
原理
菌落 PCR 实验的基本原理是以单个菌落作为模板,用无菌牙 签挑取单个菌落到 TE 缓冲液中,煮沸 10 min, 涡旋振荡后短暂离心,用 1〜2 国裂解液作为 DNA 模板,省去抽提模板 DNA 这一步,通过特异性引物或通用引物对目的基因进行快速扩增, 大大节约了时间和成本。
应用
来源:丁香实验团队
操作方法
常规的 PCR 扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐, 耗时较长,同时在反复的操作中 DNA 量损失也较大,产率较低。在 1989 年 Gussow Clackson 建立了菌落 PCR(colony PCR)法,菌落 PCR 与我们通常的普通 DNA 的 PCR 的不同在于,直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落,操作简单、快速,在
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