差示反转录 PCR 实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

差示反转录PCR也称为mRNA差异显示技术，它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，具有简便、灵敏、RNA用量少、效率高、可同时检测两种或两种以上经不同处理或处于不同发育阶段的样品，该方法自问世以来已被广泛用于差异表达基因的克隆鉴定研究中。

来源：丁香实验

操作方法

mRNA差异显示法

一、实验材料 1. 红豆杉细胞未经MJ诱导处理的A和经MJ诱导处理的B红豆杉细胞。 2. 寡核苷酸引物（1）3’锚定引物： ①H-T11A(2uM)： 5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’ ②H-T11C(2uM)： 5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’ ③H-T11G(2uM)： 5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-

荧光标记法

一、材料 1. 标本人单核细胞系U937，细胞密度2×108/L，分对照组（N）、处理Ⅰ组（T1）、处理Ⅱ组（T 2），N用1640培养基及10%胎牛血清培养，T1用IFN-γ104U/L LPS 1 μg/L、T2用IFN- γ10 U/L LPS l0 μg/L分别刺激7 h。二、总RNA的制备 1. 按试剂盒提供的方法分别提取三种细胞的总 RN