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免疫组化全攻略手册

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问免疫组化，是否能够定量，怎么实现？

土井挞克树

可以的，先把免疫组化做了然后用imageJ 分析

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问免疫组化，组织冻融3次，会对结果造成什么影响

土井挞克树

免疫组化组织这样几次冻融，蛋白会变性，影响后续实验

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问免疫组化的抗原修复方式如何选择

土井挞克树

第一种：细胞质抗原修复绝大多数细胞质抗原不做任何修复，一般也能获得相对稳定的染色结果。但采取一些抗原修复方法，可以是抗原决定簇释放的更加充分，进一步提高结果的可靠性和敏感性。所以我们一般采取的是强度适中，反应相对温和的抗原修复方法。推荐使用微波修复法。推荐的方法：微波加热修复法推荐的修复液：常用柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）第二种：细胞膜抗原修复绝大多数细胞膜抗原如果不做任何修复，它的显色结果相对

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问免疫组化过程中要注意哪些问题？如何确定抗体的滴度？

小暮

第二个问题：首先优先配置文献推荐的抗体浓度。可以在推荐浓度上下调整1到2个梯度。如果没有文献报道，可以参考浓度稀释法，按照2，4，8，16等倍稀释，直到配到可以起阳性反应的最低浓度第一个问题：防止假阳性与假阴性，防止操作中的污染； 2、规范操作时阳性与阴性对照选用2种以上同类抗体。目前肿瘤均为相关抗原，特异性不足，多种同类抗原可提高阳性率； 3、正确评价免疫组化的结果，其结果受抗体、特异性与质量、

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问免疫组化结果与文献相反是为什么？

yqc127

这可能要从两方面考虑：1. 自己的主观原因，可能是自己实验操作的问题；如果自己的问题感觉不大，也可能是抗体特异性的问题，可以看看有没有相关的文献也用了类似的抗体，进而一步步查找问题。2.标本的客观问题，由于不知道有没有可能你的标本是一个有别于文献报道的特例？还是文献报道的情况是有限制范围的？这要自己斟酌。即使是同一样本，由于存在取材，保存，处理等多方面的差异也可能导致最终的结果的不同。

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问免疫组化抗体浓度一般怎么设置呢？

huarenqiang5

免疫荧光的一抗浓度一般高于免疫组化的一抗浓度，但是也要看具体情况：因此免疫荧光一般采取二步法，而免疫组化中有biotin放大这一步。所以建议免疫荧光的时候重新摸索浓度，要是采用三步法可能不需要摸索了。另我们免疫荧光抗体一般用推荐浓度。免疫荧光抗体浓度要根据免疫组化结果的强弱调整，如果较强，用相同浓度即可；如果组化阳性较弱，那么做荧光时要加大抗体浓度。至于免疫组化的抗体是否能做免疫荧光，其实是由组织

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问免疫组化和WB可以用同一种抗体吗？

天一湖医者

可以，如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。

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问肺癌切片免疫组化的结果如何判读

dxy_gwrp7ndq

主要依靠其免疫组化作为重要的诊断依据，TTF-1、 NapsinA、CK7阳性，提示是肺腺癌。P40、P63、CK14阳性，提示是肺鳞状细胞癌。CgA、Syn、CD56阳性，提示是肺的神经内分泌肿瘤。上述所有的神经内分泌标记、腺癌的标记和鳞癌的标记都是阴性，则提示是肺的大细胞癌。判断免疫组化染色为弥漫强阳性的标准为，大于等于10%的肿瘤细胞阳性，信号定位准确，且被染成黄色或褐色颗粒。局灶阳性或弱阳

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问免疫组化平均光密度值

bamboopiggy

你应该圈出阳性的区域，然后算光密度值，否则虽然有阳性，但是平均下来，可能会低。

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问免疫组化实验，切片厚度多少合适？

梁总的贴身医生

一般组织切多厚是依据实验目的而定的。一般大鼠大脑要做免疫组织化学的话，需要把细胞切开，抗体容易进到胞质（如果是胞核染色则需要进一步核膜打孔，跟细胞膜打孔一样，常用triton x-100），一般神经细胞的胞体的大小差异很大，小的直径仅5～6μm，大的可达100μm以上，结合文献会发现，经常切30um或者20um，这样可以切开多数的细胞

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问免疫组化图片明明肉眼可见是增强的，但是Image J分析mean值却反而下降，这是为什么呀

土井挞克树

有可能是image的灰度值没有设置正确，image的参数设置错误就会出现相反的结果

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问免疫组化中抗原修复的最佳条件是什么？尤其是微波修复。

丁香实验

关于抗原修复，我个人的观点和panther75有点不同。我试过的修复条件有EDTA热修复，柠檬酸钠为缓冲液的微波修复以及高压锅修复。从我的实验结果来看，微波修复其实很不容易掉片子的，而EDTA热修复和高压锅修复是很容易掉片子的。因为掉片子主要是因为加热过程中产生的气泡所引起，而微波修复水加热到沸腾，沾在片子上的气泡就会少，不会因为小气泡上串引起脱片。做EDTA修复时，你可以将片子靠的尽量近些，或是

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问免疫组化阴性对照结果阳性。可能的原因

土井挞克树

阴性组有阳性产物污染，或者抗体特异度太低

6 回答1748 围观

问免疫组化用不用TritonX-100打孔有什么区别？

balalaLy

tritonx-100的作用是破膜，所以看你的蛋白表达在哪里，如果是膜表达蛋白不需要打孔，其它的比如胞浆蛋白或者核表达蛋白都需要

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问免疫组化的需要进一步结果验证么

txs900416

一般组化做的同时会做一个isotype control，从而排除假阳性的干扰，从而无需做进一步结果验证

2 回答311 围观

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