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表观遗传学研究技术概览
表观遗传学研究技术概览
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问
怎么提取植物组蛋白H3呢,想检测H3的乙酰化,是过一些方法沉淀太少没有办法继续做,想求个实验方法,谢谢大家。
土井挞克树
你可以参考一下这篇论文,这是小麦组蛋白提取方法的论文
2 回答
405 围观
问
整膜敷泛乙酰化抗体,显影70kDa marker那非常黑,求大神解答,感谢!
bamboopiggy
因为marker也是不同size的蛋白制成的mix,也会和抗体起反应,所以有黑色的条带,你用的是发光试剂显影吧?可能是你的蛋白浓度太高了,把辣根过氧化物酶给消耗干净了,所以反而没有光了,就泛白了
3 回答
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问
CpG位点甲基化研究
土井挞克树
你的思路可行性很高,利用甲基化来检测。
3 回答
480 围观
问
rna m5c甲基化
Eason老歌迷
有。BSP是甲基化检测的金标准,这里就不细说了。主要说说MSP—甲基化特异性PCR。MSP的实验过程简单来说就是提取样本中的DNA进行亚硫酸盐转换,将转换的DNA进行定量PCR,由此来确定特异基因甲基化修饰,这样就可以实现你需要的某个特定基因甲基化检测。
1 回答
480 围观
问
在质粒的双酶切以及回收中,为什么DNA的甲基化程度会影响核酸限制性内切酶的活性?
未来9
DNA甲基化以后,就不再被限制性内切酶识别和切割。
3 回答
653 围观
问
甲基化问题
土井挞克树
因为他们两个是负相关🤔,所以表现出相反的反应。
3 回答
346 围观
问
为什么染色质免疫共沉淀的时候,抗体加多了反而免疫效率低了?
府宅
抗体过多,会使假阳性信号增多,影响免疫效率
3 回答
327 围观
问
消化的染色质浓度过低怎么处理?
丁香实验
如果染色质制备物的 DNA 浓度接近于 50 μg/ml,则向每次 IP 中添加额外的染色质以确保每次 IP 至少产生 5 μg,然后继续实验。②在交联之前计算备用平板上细胞的数量,以确定准确的细胞数量,在声波处理前后在显微镜下观察胞核,以证实胞核完全裂解。
1 回答
322 围观
问
染色质为什么要片段化,片段化长度是多少
府宅
一般片段化的大小在200-1000bp,一般300-600bp均能获得较好的ChIP结果。如果小于200bp的话,蛋白的结合位点很有可能被打断,原因是由于每个核小体结合DNA的序列长度为175bp,加上不同核小体间的linker DNA序列,这样每个核小体结合DNA的最小序列大概在200bp左右,如果片段长度大于1000bp,您将会分离获得包含目标序列的DNA,但所要研究的蛋白可能会离您目标序列有
2 回答
624 围观
问
染色质为什么要片段化?片段化的长度为什么是200-1000?片段化过度或不足对实验会有什么影响?
bamboopiggy
你说的是做chip吧?chip是要把染色质打断,好让你的目的蛋白和dna更好的结合,太长了构象复杂,不利于蛋白质和dna的结合,一般打的片段,在200-1000bp之间,就可以。太小了,可能结合不好。
3 回答
540 围观
问
染色质消化不足且片段过大(大于 900 bp)怎么处理?
丁香实验
①确定甲醛浓度,将交联时间缩短至 10 分钟或更短。②在交联之前计算平板上细胞的数量,以确定准确的细胞数量;③适当延长染色质消化时间。
1 回答
266 围观
问
染色质免疫超声时片段不碎该如何解决?
bamboopiggy
先确定你的超声破碎仪的参数是对了没有,然后做预实验,把你 超声后,跑胶的图发上来看看,那个是看不到很清晰的条带的,都是些smear的band
3 回答
402 围观
问
请问用trizol提取的DNA可以用于表观修饰的实验吗?(如甲基化、CHIP等)
Guoood
可以使用传统trizol 法提取DNA进行甲基化等表观遗传实验,用试剂盒纯度和浓度反而不如trizol 法
5 回答
474 围观
问
ChIP实验中使用超声方法断裂染色质温度不易控制,可能会使蛋白变性,影响ChIP结果,有没有较好的优化方案?
dxywode
目前,市面上有很多打断仪器是可以持续控制温度在指定温度的。也就是说可以将温度控制在一个比较冷的环境中,这样可以减少你所说的蛋白质变性的可能。同时在打断时可以选择间断循环打断。就是可以减少打断的时间,增加打断的循环数,从而达到同样的打断效果和降低蛋白变性的可能性。
2 回答
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问
关于chip-seq或者cut-tag的问题
府宅
ChIP-seq可以不设置生物学重复;如果设置生物学重复,要尽可能增加重复个数。
3 回答
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