免疫组化全攻略手册

细胞爬片技术自诞生以来，就在不断进化以满足科研人员对组织细微结构及蛋白表达进行精确检测的需求。从手工制作到自动化处理，从简单染色到多重标记，极大提升了实验的精准度和效率。相较于石蜡切片，细胞爬片能更好地保存组织的三维结构和更丰富的表面抗原信息，而相比于冰冻切片，它在多染色的复杂实验中显示出更高的稳定性。常作为免疫组化和免疫荧光检测的检测样本，助力观察特定细胞类型的分布、识别病变细胞以及监测药物对细

免疫组化染色是免疫组化实验的核心步骤之一，其目的是通过抗原抗体特异性结合以及化学反应将抗原表达情况转化为可见的颜色信号。免疫组化染色的流程包括：脱蜡水化、抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗孵育、酶底物显色或荧光检测、封片观察等步骤。图：石蜡切片免疫组化染色流程图以微波炉热修复为例，展示石蜡切片组化染色实验流程：1、脱蜡处理将石蜡切片放置于二甲苯溶液中，分为两个染色缸，依次处理 20 min/缸后，依次

相较于石蜡切片，冰冻切片具有制片快速、抗原活性好的优势，在免疫组化染色中无需进行脱蜡和抗原修复。主要流程包括：样本前处理、封闭、一抗孵育、二抗孵育、酶底物显色或荧光检测、封片观察等步骤。图：冰冻切片免疫组化染色流程图以直接取材为例，展示冰冻切片组化染色实验流程：1、实验前处理 冰冻切片取材可分为动物灌流固定和直接取材：动物灌流固定：a.通常采用预冷的 1xPBS 灌流冲洗至血液全部放出，随后灌注4

免疫组织化学技术是应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体

免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某

免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（