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层析纯化百科宝典

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问柱层析纯化抗体问题解答

府宅

色谱柱填装紧与否对分离效果很有影响，若松紧不均，特别是有断层时，影响流速zhi和色带的均匀，但如果装时过分敲击，色谱柱填装过紧，又使流速太慢。影响层析柱整体渗透速度分布不均，致使色素带不是整齐的环状色素带，进而增长分离各色素的时间，应在装填层析柱前用适量的丙酮润洗一下，后在装入氧化铝时应边加边敲打层析柱使氧化铝殷实，然后用真空抽滤方法，用乙醚进行抽滤至无气泡为止。

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问蛋白纯化实验前需要先做好哪些准备？

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对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况：（1）得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等；（2）利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料

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问蛋白纯化时发现沉淀出现问题？

Eason老歌迷

硫酸铵沉淀是很粗的分级方法，建议你精纯的话还是要过柱子的。

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问分子伴侣共表达的蛋白纯化

Eason老歌迷

通常机器用线性方法洗脱蛋白这样方法有的时候并不能得到好的纯化效果，可选择不同浓度的咪唑做阶段洗脱，此外可用盐酸胍代替尿素试一试。

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问为什么蛋白纯化后分子量变小了？

Eason老歌迷

这个属于正常，纯化后有洗脱，浓度更纯，可能分子量就变小了。

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