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对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况:
(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;
(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大分子的量变化很大,另外与季节性关系密切。对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理。另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。
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对组织进行进行均质化,时间尽可能短,减少不必要的蛋白质水解变性 在4℃预冷的缓冲液中进行均质化处理和后期分离操作,有助于降低蛋白质水解,在缓冲液中添加蛋白酶抑制剂控制蛋白质水解
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1.一定要做预实验。
2.确定你的蛋白确实能表达,最好有考染的结果,同时用wb证明,确实是你要的蛋白。
3.优化一下你蛋白产量,尽可能的提高蛋白产量。
4..注意缓冲液的ph值
5..要根据填料的结合载量来选择柱子和填料的规格。