求助TEV蛋白酶菌株或者质粒求助TEV蛋白酶菌株或者质粒

我们实验室可以提供tev质粒。

我们实验室有TEV蛋白酶株，可以提供

可以提供以下几点建议:

1. Addgene上有一些已发表的TEV蛋白酶表达质粒可以购买,比如pRK793、pMHT235等,使用较广泛。

2. 也可以在NCBI的Nucleotide数据库中搜索TEV protease找到相关序列,设计引物克隆到质粒如pET系列载体中。

3. 常用的TEV蛋白酶表达宿主菌株:

- E.coli BL21(DE3):含有T7 RNA聚合酶,IPTG可诱导蛋白表达。

- E.coli Rosetta: 编码稀有tRNA,帮助表达包含罕见密码子的蛋白。

4. 表达条件的优化:

- 降低温度至15-20°C可以提高融合蛋白的溶解性。

- 小量IPTG (0.1-0.25 mM)诱导,降低毒性。

- 加入可溶性标签如MBP标签,可以提高TEV酶的溶解性。

5. 也可以尝试使用毕赤酵母、哺乳细胞等其它表达系统获活性TEV蛋白酶。

6. 商业公司也售卖纯化的TEV蛋白酶产品。