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利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验
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简介
鉴定蛋白激酶底物是蛋白激酶研究的一个主要焦点，并为解析信号转导途径及其复杂的调节提供证据。我们在此介绍一种以蛋白质芯片技术为基础的离体实验方法，用特异蛋白激酶对固定在芯片上的蛋白质进行系统磷酸化筛选。这种高通量方法可以用来鉴定可能的激酶底物。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。
来源：丁香实验
操作方法
3.1 非变性条件下重组激酶的纯化 用于磷酸化筛选的激酶必须是可溶和有活性的，且无其他激酶参杂的纯化激酶。因此，我们可以从 cDNA 表达文库中，大量生产和纯化组氨酸标记的重组蛋白质激酶，这些 cDNA 表达文库包括，用大肠杆菌载体 PQE30NST ( 检索编号：AF074376；22 ) 构建的大麦表达文库，或用 pQE30NASTattB 载体（检索编号：AY386205；23；也可见 2
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