蛋白质组学研究蛋白质芯片
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蛋白质组学研究蛋白质芯片
蛋白质 芯片的研发是由基因芯片延伸而来,基因芯片技术早已商品化并应用于科学研究,蛋白质芯片的应用还比较局限。由于蛋白质分子自身的复杂性,以及针对不同用途和需要的蛋白质检测和鉴定,使蛋白质芯片的开发成为一项巨大的挑战。目前大多数蛋白质芯片每次只能分析少量的蛋白质。由于蛋白质是生命活动的直接承担者,因此蛋白芯片比基因芯片有更广阔的应用前景。
蛋白质芯片可检测蛋白质分子、蛋白质与核酸、蛋白质与其他分子的相互作用。首先将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于载体表面形成微阵列,所用载体有玻璃片、多孔胶片或其他高分子材料等,将标记后的探针靶分子与微阵列进行杂交,并对结果进行检测,从而实现对生物分子的准确、快速、大信息量的检测。
抗体芯片是蛋白质芯片中发展最快的芯片,可用于研究在不同生理状态或病理状态下蛋白质水平的量变。蛋白质抗体芯片是通过机械点涂的方法,将多种不同的单克隆抗体点样固定在固相介质表面(如PVDF膜)上制成的。它与置备的多种抗原样本杂交、结合后,芯片上的抗体捕获相应抗原,然后再与标记的多种不同抗体杂交。由于蛋白质抗原有多价结合位点而与标记抗体结合,根据杂交信号的有无、多少进行定性或定量研究。个别抗体芯片已应用于临床,如肿瘤标志物抗体芯片。第一张商品化的抗体芯片是由美国BD Clontech公司推出的,这是一张用于研究的抗体芯片,芯片上排列了378种已知蛋白质的单克隆抗体(AbMicroarray 380),这些单克隆抗体对应的蛋白质都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白质,涉及信号传导、肿瘤、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡和神经生物学等广泛领域,通过这张芯片,在一次实验中就能够比较几百种蛋白质的表达变化。
蛋白质芯片技术也可用于分析蛋白质相互作用。酵母双杂交系统是一种应用极为广泛的鉴定蛋白质相互作用的方法,但操作复杂,而蛋白质芯片是高通量分析蛋白质相互作用的有利工具。
蛋白质分离芯片是蛋白质芯片研究的另一个主要领域,是以玻璃、多孔硅或一些高分子材料作为基质,通过一定的技术在基质上刻蚀出各种形式的孔道,通过色谱、电泳不同的分离模式或不同方法和模式的组合,实现蛋白质或肽段的分离。