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测CAT时,是用煮死的酶用来校零,测对应活着的酶的吸光度吗?另外,煮死的酶在测定时显示的吸光度不稳定,一直在变,可能是什么原因呢?

相关实验:过氧化氢酶(CAT)活性的测定

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dxy_kowr44a7


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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

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不是的,应该用未灭活的酶来测,把酶灭活之后再进行校零则数据不准确,不具有参考意义

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dxy_mqg1dtg8

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可能是由于样品的分解或者氧化等因素导致的。为了避免这个问题,可以尝试使用新鲜的煮死CAT酶样品,或者在样品制备和测定过程中加入适当的抗氧化剂,如抗坏血酸等,以减少样品的氧化和分解。此外,也可以尝试进行多次测定,取平均值来减小误差。

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沫子大大

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测定活着的酶的吸光度时,应该使用未经煮沸灭活的酶样品。测定时应该在一定的时间范围内完成,以避免酶活性的变化对测定结果的影响。

煮沸灭活的酶在测定时显示的吸光度不稳定,可能是多种因素导致的。可能是因为煮沸灭活的酶在煮沸过程中被部分降解,导致其蛋白质结构发生变化,从而影响其光学性质。此外,煮沸灭活的酶可能会与其他试剂发生反应,产生吸光度的变化,或者试剂本身就存在不稳定性,导致吸光度的变化。因此,建议在进行酶活性测定时,尽可能使用新鲜的酶样品,并严格按照实验流程进行操作,以确保实验结果的准确性。

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loveliufudan

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在测定CAT(Catalase)酶活性时,通常会使用煮死的酶作为校零对照。煮死的酶在测定时不具有活性,它提供了背景吸光度或非酶催化的吸光度值。通过从活着的酶吸光度中减去煮死酶的吸光度,可以得到仅与酶催化相关的吸光度信号。

关于煮死酶吸光度不稳定的问题,可能有几个原因:

1. 沉淀:煮死酶在处理过程中可能发生沉淀,导致吸光度的变化。确保在测定前充分悬浮煮死酶,并避免将沉淀物投入测定中。

2. 酶降解:尽管煮死的酶已经失去了活性,但其结构可能仍然容易受到降解的影响。如果煮死酶在测定过程中发生降解,可能会导致吸光度的变化。存储煮死酶时,注意避免温度过高或长时间的暴露。

3. 溶液条件:测定过程中的溶液条件可能对煮死酶的稳定性产生影响。确保使用适当的缓冲液、pH值和温度来维持煮死酶的稳定性。

如果煮死酶的吸光度变化过大或不稳定,可能会对CAT酶活性的测定结果产生干扰。在这种情况下,建议重新准备煮死酶,确保其质量和稳定性。同时,可以通过进行技术重复和采用其他质控方法,如阳性对照样品,来验证CAT酶活性测定的准确性和可重复性。

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