蛋白磷酸化改变

首先你需要排除一下是不是磷酸化没有跑出来?你是用什么封闭的呢?跑磷酸化封闭一般用BSA。

如果改善条件重复跑了还是这样的结果，你可能需要排除一下你做的处理是不是同时对AKT和磷酸化酶都有影响。

总蛋白有改变的话，磷酸化没改变可能是磷酸化检测出现失误，比如试剂变性，检测条件异常等。

这个可能是由于akt的蛋白质稳定性受到调控的影响，导致总蛋白水平下降。而磷酸化水平可能受到其他因素的影响，例如磷酸酶的活性等等。另外，磷酸化水平的检测方法和总蛋白检测方法也不同，可能存在检测误差等因素。需要进行更深入的研究才能确定具体原因。

一般判断akt通路是否激活是用磷酸化akt/总akt）比值来判断，单独变化作为参考的价值有限。对于akt总蛋白下降但磷酸化水平不明显可能是因为药物处理，样品收集及处理，或是实验过程中存在影响导致。

蛋白的磷酸化水平/总蛋白表达水平，再去比较对照组和实验组，才是正确的

这种现象可能存在多种可能的解释，以下是一些可能的原因：

不同时间点的采样可能导致了这种现象。如果您在不同时间点采集了样本，那么不同时间点的样本可能反映了不同的生物过程，因此导致了不同的结果。

技术问题可能导致了这种现象。不同实验室或研究人员使用的技术和实验方法可能不同，这可能会导致结果的不一致性。例如，如果使用不同批次的试剂，可能会导致结果的变化。

细胞类型和处理方法可能导致了这种现象。不同的细胞类型可能对刺激和信号反应有不同的反应，这可能会导致结果的不一致性。此外，如果处理方法不一致，也可能导致结果的不一致性。

生物学差异可能导致这种现象。即使在同一实验室使用相同的方法进行处理，不同的生物体可能具有不同的生物学特征和响应，这可能会导致结果的不一致性。