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做sdspage的时候上层蛋白质条带总是会消失,有没有大神能帮忙看一下会是什么原因导致

相关实验:利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验

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lyK0EN

聚丙乙烯酰胺凝胶电泳,感觉每步都是按步骤来的,最后跑出来后面条带上层蛋白质条带总是锯齿状缺失,求大神告知一下会是什么原因导致的

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

我之前也经常出现锯齿,后来发现是蛋白降解了,你可以跑个电泳验证一下

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loveliufudan

有帮助

有多种可能性导致SDS-PAGE上层蛋白质条带消失或缺失,以下是一些可能的原因:

样品加载量过多或过少:如果加载的样品量过多,可能会导致上层蛋白质条带被压缩或完全消失;如果加载的样品量过少,则可能会导致上层蛋白质条带太弱,无法被检测到。

样品中存在未被还原的半胱氨酸二硫化物:在SDS-PAGE中,半胱氨酸二硫化物会导致蛋白质分子无法充分展开,从而影响电泳分离。如果在还原步骤中未能将所有半胱氨酸二硫化物还原为单硫化物,则可能导致上层蛋白质条带消失或缺失。

堆积效应:如果使用的凝胶浓度较高,且运行时间过长,则可能导致堆积效应,使得上层蛋白质条带消失或缺失。

均质性问题:如果样品不够均匀,可能会导致蛋白质分子在凝胶中分布不均,从而影响电泳分离,导致上层蛋白质条带消失或缺失。

电泳条件不合适:例如,电压或电流设置不正确,或者缓冲液浓度不合适,都可能导致上层蛋白质条带消失或缺失。

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sswei

有帮助

可能原因是迁移过快或电泳温度过高。

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