请问哪位好心人有大鼠睾丸冰冻切片的protocol吗？

最好是去掉白膜，然后延长固定时间，一般就不容易碎。

固定：将组织置于4%多聚甲醛固定液中，4℃摇床过夜。

漂洗：将固定后的标本用1X；PBS漂洗三次，每次15分钟。

脱水：将组织置于30%蔗糖溶液中，4℃摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，判断的标准是，当管竖直时，组织是否沉到蔗糖溶液的底部，若组织已完全沉降到蔗糖溶液的底部，平放或震荡后仍能沉降，则可判断组织已脱水完全。

包埋：将组织倒入培养皿中，做好标记。之后将组织置于包埋盒中，用滤纸吸干组织周围多余的蔗糖溶液，滴加OCT（optima cutting temperature compound）到包埋盒中，用移液枪头小心的将组织周围的O.C.T混匀，切忌起气泡，静止10分钟，以防切片时脱片。重新取一个包埋盒，将组织移入到包埋盒中，倒入OCT，再次用移液枪头将组织与O.C.T混匀，将组织按切片需要方向摆放于包埋盒的底部，迅速置于干冰与酒精的混合物中。在包埋盒上做好标记，用保鲜膜和锡纸包好后放入-80℃冰箱贮藏待切