bonnnnnes
我的蛋白是在包涵体当中,此类型蛋白已经纯化过三次,都比较robust。但惟独这一个蛋白在过完离子交换柱(buffer中含1M NaCl和7M 尿素)后收集fraction透析时发生沉淀。透析外液为水➕2mM beta巯基乙醇。我知道这个透析液的条件可能有些太突然,但因为此前所有蛋白在这个条件下都没有发生沉淀非常稳定,只有这个蛋白很容易沉,我查阅了下之前类似的问题,有人建议用梯度透析的方法(4M尿素,2M尿素,1M尿素...)但我不想让蛋白在变性剂下呆太久,因为文献上说在变性剂中呆太久对蛋白性质不好。
请教了下之前提过这个蛋白的师姐,她也说这个蛋白就是会沉,所以每次她都20L菌液一起提,透析完离心后上清中总会有一部分没沉完的蛋白。。。
诚心请教大家!
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