Enthusiasm92TX
因为我要做CD所以要用PB缓冲液置换溶有蛋白的buffer,但是置换用的是脱盐柱,当我的蛋白带正电时蛋白与盐粒子分不开所以达不到置换的目的,所以要把PB的pH调到大于蛋白等电点pI8.57,问题1.可以把PB的pH调到8.57以上吗?问题2.怎么调?
求解答
汤姆卜丽波
可以调的,你们实验室平时用什么调就用什么调,我们一般用氢氧化钠和硫酸
huarenqiang5
可以调到8.0,在1L里加入8克氯化钠,再称量0.01M的磷酸二氢钠加入,用600ml左右的水溶解,再用氢氧化钠调PH到8.0.如果有经验,也可以用一定比例的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠加入,控制到PH为8.0。
loveliufudan
有以下建议:
1. PB缓冲液的pH理论上可以调节到9.6,但实际操作时需考虑以下因素:
(1) PB中的磷酸盐缓冲能力在pH 8以上会下降,调节到9.6时缓冲能力较弱,pH不稳定。
(2) 高pH会改变蛋白质电荷,可能影响其活性。pH 8.5-9之间是合理的选取范围。
(3) 调节pH时要控制离子强度,避免影响柱材吸附效果。
2. PB缓冲液pH的调节方法:
(1) 使用NaOH或KOH来调节pH。缓慢滴加,同时测量pH,调节到理想值。
(2) 可以配制不同pH的PB存储液,然后按比例混合来获得所需pH。
(3) 也可以购买不同pH梯度的PB缓冲液进行直接使用。
综合考虑,我建议调节pH最好控制在8.5-9区间,方法上可用NaOH/KOH滴定或混合不同pH的PB来实现。操作时注意控制离子强度和缓冲能力。
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