求问6kDa蛋白的转膜条件

我之前转过4.5KD

电泳90Vmaker跑开就停止。

电转用PVDF膜。0.2A。9分钟

你这个试试0.2A12分钟

PVDF膜用甲醇激活

这个蛋白分子量好小啊

建议用半干转

  8V 10min

可以尝试一下

以下是一些常见的转膜条件适用于大约6 kDa的蛋白质：

1. 膜类型：选择适合的膜类型，如聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）或聚偏二氟乙烯膜（Polyvinylidene fluoride membrane）。这些膜通常用于转膜小分子量的蛋白质。

2. 转膜缓冲液：使用合适的转膜缓冲液，例如Tris-甘氨酸（Tris-Glycine）缓冲液。缓冲液的pH和离子浓度应根据实验要求进行调整。

3. 转膜电流：常见的转膜电流密度约为0.8-1.0 mA/cm²。根据蛋白质的大小和所使用的膜类型，转膜时间可能需要进行优化。

4. 转膜时间：对于6 kDa的蛋白质，常见的转膜时间范围是30-60分钟。转膜时间的选择应在保证蛋白质完全转移到膜上的前提下进行优化。

1.小分子蛋白很容易转过，所以摸索适合自己蛋白的转膜条件很重要，这一步很难说一次就成功，所以刚开始的时候可以在接触胶面的PVDF膜上再放一张PVDF膜，转膜结束后，立春红染色，观察使用的条件是否会转过头

2.小分子蛋白Western转膜液中一定不要加SDS，因为SDS会影响转膜效果

3.小分子蛋白湿转参考100V恒压，或者150-200恒流，40-60min，都可以跑出来结果，同时也可以保证内参的效果很好

4.小分子蛋白Western转膜液甲醇浓度为20%

5.分子量小于10 kDa的多肽或蛋白，建议使用Tricine-SDS-PAGE电泳和转膜系统。