免疫荧光实验请教
finix111
各位大神们，
①请问怎么看免疫荧光的背景干不干净？
②有无小技巧可以避免非特异的干扰，调整荧光图片的放大比例？选择更好的视野避开非特异？
③如果抗荧光淬灭剂含DAPI，还需要另外染DAPI吗？如果超过15min影响大吗？
④大神们如果有更好的建议欢迎批评指正，感谢！！
以下4张图是我今天染的拍的部分片子，奇怪的就是有些地方只有其中一个膜蛋白，没有DAPI（第2、4张图中红色方框）。而有些地方有DAPI，但是膜蛋白的颜色没有染出来，共定位的另一个膜蛋白也没有出来（第4张图蓝色圆框），这是正常的吗？？
今天因为来不及洗DAPI，染了有15～20min左右，会不会是DAPI染过头了
1 个回答
loveliufudan
有帮助
1.背景的干净程度可以通过观察荧光信号与噪声之间的对比度来评估。如果荧光信号明显且噪声水平低，则背景较为干净。
2.为了避免非特异性干扰，可以通过以下技巧来调整荧光图像的放大比例和选择更好的视野：
选择适当的曝光时间和增益来控制荧光强度和信噪比。
对于多重染色样品，可以调整荧光通道的颜色合成，以便区分不同的标记。
对于复杂样品，可以使用3D成像或多个视角的图像来避免非特异性干扰。
3.如果抗荧光淬灭剂含有DAPI，则不需要另外染DAPI。但是，如果DAPI染色时间过长，可能会导致细胞核变形或者染色不均匀等问题。一般来说，DAPI染色时间在5-10分钟左右比较合适。
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