Annexin-V/PI 双染 测H9C2心肌细胞系凋亡 拍荧光图

正确的顺序是先滴结合液然后滴甘油然后爬片。

关于Annexin V和PI的浓度，具体的浓度应该根据你所用的试剂和实验条件进行优化。一般来说，Annexin V的浓度可以在5-25μl之间，而PI的浓度则一般在5μl左右。需要注意的是，如果Annexin V的浓度过高，可能会导致假阳性结果，因此需要根据实际情况进行调整。

关于甘油的使用，一般是在制备薄片时使用，可以起到保护细胞的作用。如果你的试剂盒说明书上建议在爬片放到载玻片上前先滴一滴结合缓冲液，那么可以先滴一滴缓冲液，然后再放上甘油的爬片，最后覆盖载玻片即可。

另外，如果你拍到的Annexin V/PI荧光图中绿色信号不够明亮，可能需要优化染色步骤或者调整检测参数。例如，可以尝试增加Annexin V或PI的浓度、优化染色时间或者改变荧光显微镜的设置等。需要注意的是，不同的荧光显微镜和相机系统可能需要不同的参数设置，需要根据实际情况进行优化。