原代兔软骨细胞怎么取

可以选用1d龄新西兰兔膝关节软骨获取大量软骨细胞，存活率高。

一般选用3周龄的新西兰大白兔，因为它们的关节软骨组织总量较多，而且软骨细胞的增殖、合成、分化功能比成年动物强。

采用机械解离和化学解离法，先用手术刀削下双侧膝关节软骨，再用胰蛋白酶和胶原酶联合消化法分离出软骨细胞。

原代培养应选用适当的接种密度，一般为2x105 cells/cm2，并用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养。

传代培养时，当细胞达到80%汇合时，用0.25%的胰蛋白酶消化5-10分钟，再接种到新的培养瓶中。

进行软骨细胞的实验时，应选用3代以内培养的软骨细胞，因为它们相对稳定，保持了细胞的表型和生物学特性。

可以用甲苯胺蓝染色技术进行软骨细胞的表型鉴定，因为软骨细胞分泌的蛋白多糖能被甲苯胺蓝异染，呈红色或紫红色。

一般选取新西兰兔，2月龄的就可以