sswei
对荧光样品进行成像时,有几个问题需要考虑在内,包括在样品台位置、光泄露和自发荧光、背景光信号、大约的光信号水平及光圈设定等。
组织光学影响:在进行活体荧光成像时,激发光必须到达动物体内的荧光基团,才能开始整个荧光激发过程。一旦荧光基团吸收了激发光,荧光就会被触发。尽管如此,由于光学特质是组织,激发光在到达荧光基团和离开在动物表面被检测到的过程中,光信号就会被散射或吸收。激发光也会导致组织自发荧光。自发荧光的量取决于激发光源的强度和波长,以及组织的类型。自发荧光在整个动物体内都会发生,但是在激发光最强的表面,自发荧光也是最强的。常规食物中的叶绿素会造成肠道区域的自发荧光。一般建议选择没有荧光的饲料饲喂或者提前一天给动物禁食不禁水。
loveliufudan
可能有以下几个原因:
荧光探针的自发荧光:一些荧光探针本身就具有一定程度的自发荧光,这种自发荧光会在成像过程中产生类似信号,不过这种自发荧光一般是非常弱的,可以通过空白控制来排除。
细胞自身的荧光:在一些情况下,细胞本身也会产生一定程度的荧光,比如叶绿素在植物细胞中的自发荧光。这种荧光也会在成像过程中产生信号,需要通过对照组来排除。
误差或其他非特异性荧光:在成像过程中,由于光学器件的性能限制或成像条件的差异,有时候会产生一些误差或非特异性荧光信号,这些信号也需要通过对照组来排除。
对于如何解决对照组出现荧光的问题,有以下几种方法:
空白控制:使用不含荧光探针的培养基或缓冲液等作为空白对照,通过对空白对照进行成像,可以排除掉探针的自发荧光。
负对照:使用不含目标分子的细胞或组织作为负对照,通过对负对照进行成像,可以排除掉细胞自身的荧光或误差信号。
数据分析:通过对成像数据进行严格的数据分析,包括背景去除、信噪比分析、信号强度标准化等,可以提高数据的特异性和可靠性。
梦璃殇怀
用的不含荧光的小鼠做对照,但是不含荧光的也有荧光信号,请问这种应该怎么解决呢
土井挞克树
对照组出现荧光可能是对照组存在非特异性结合。建议去除非特异性组分
梦璃殇怀
请问用的是小鼠活体成像和组织成像应该怎么去除呢
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