胶质瘤细胞系GL261细胞形态求助🆘

这细胞基本不行了，可能是消化多度或者吹打太多，非常多的细胞碎片。可以再尝试一下，控制消化时间，拍拍培养皿侧壁细胞脱落即可终止消化，然后加培养基略微吹打后离心重新铺板，数小时后观察细胞贴壁了，可以用pbs再轻轻润洗两遍，去掉细胞碎片。

可能是细胞贴壁不良导致细胞聚集成团生长。以下是一些可能的解决方案：

细胞密度调整：调整细胞的密度，通常使用的细胞密度为1×10^4到1×10^5个细胞/mL，过低或过高的细胞密度都会导致细胞不易附着在培养基上。

培养基选择：对于胶质瘤细胞系GL261，建议使用适当的培养基，例如DMEM/F12或DMEM高糖培养基，并添加10%的胎牛血清或FBS。

细胞处理前处理培养板：在细胞处理前，用70%乙醇对培养板进行消毒处理，并在空气流量下放置15-30分钟使其完全干燥，这样有利于细胞附着。

确保培养条件：细胞的生长需要适宜的温度、CO2浓度和湿度等条件，确保这些条件符合要求。

细胞冻存和解冻：确保在细胞冻存和解冻过程中正确操作，否则可能影响细胞的质量和附着性。

避免过度培养：胶质瘤细胞系GL261的生长速度较快，过度培养会导致细胞的代际老化和附着性下降。

原因:1. 细胞死亡释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团（消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等）。

2. 细胞离心速度过大或时间太长。

3. 消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难！

4. 状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

5. 传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

6. 传代后细胞铺板不均匀。

7. 有可能是杂细胞，或者死细胞。

8. 细胞未消化开。

9. 非震荡培养或细胞量过多的话就会成团。

如何避免细胞抱团？

1. 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

2. 对于贴壁非常牢固的细胞，为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤，保证细胞的状态能够最优。

3. 细胞生长密度不要太高，70%－80％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现堆叠生长），这样细胞抱团的的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落，可先将细胞低密度传代，第二天再消化传代，这样连续传三次，细胞抱团就会越来越小，这样几代过后，再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

4. 消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。

5. 消化过程需要使用枪头轻轻吹打，切忌使劲拍培养瓶的侧壁。拍瓶子想要将细胞拍散的力度对于细胞来说相当于大地震，细胞本身是无法承受如此振荡的。

细胞抱团要如何处理？

1. 如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数的时候要麻烦点了。

2. 如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

3. 如果细胞抱团是肉眼可见的，那就让细胞静置半半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，那可能没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

可以再观察看看，时间长了会打开的。