土井挞克树
看你的细胞量,一般密度的加0.5ml左右的裂解液
sswei
样本与组织比例=1:3~3.5 w/v,一般为150~170mg:500μl。
huarenqiang5
一般加入裂解液0.2-0.3ml或47-141ul/50ml培养瓶。
loveliufudan
在进行悬浮细胞的蛋白质提取时,裂解液的加入量应该根据细胞数量和裂解液浓度来确定。一般而言,推荐使用的裂解液浓度是至少10倍于细胞体积的浓度,通常用1毫升的裂解液去裂解1 x 10^7 个细胞。
具体来说,可以按照以下步骤操作:
收集所需数量的悬浮细胞,并用PBS或其他缓冲液洗涤细胞一次,去除细胞培养基等残留物。
将细胞沉淀后加入足够的裂解液,建议使用含有离子型或非离子型洗涤剂的裂解液,可以增加蛋白质的提取效率和纯度。
振荡或旋转等方式将细胞充分裂解,可以考虑使用震荡器或超声波细胞破碎器等设备。
将裂解后的混合液离心,去除残留细胞碎片等杂质,收集上清液中的蛋白质。
需要注意的是,具体加入裂解液的量还取决于实验要求和细胞类型等因素。为了获得最佳的蛋白质提取效果,可以在实验前进行优化,测试不同的裂解液浓度和裂解时间,并选择最佳的实验条件。
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