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悬浮细胞提取蛋白质加多少裂解液?

相关实验:细胞蛋白质总量样品的制备及分析

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青云羡鸟飞KN22

谢谢大佬们

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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

看你的细胞量,一般密度的加0.5ml左右的裂解液

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sswei

有帮助

样本与组织比例=1:3~3.5 w/v,一般为150~170mg:500μl。

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huarenqiang5

有帮助

一般加入裂解液0.2-0.3ml或47-141ul/50ml培养瓶。

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loveliufudan

有帮助

在进行悬浮细胞的蛋白质提取时,裂解液的加入量应该根据细胞数量和裂解液浓度来确定。一般而言,推荐使用的裂解液浓度是至少10倍于细胞体积的浓度,通常用1毫升的裂解液去裂解1 x 10^7 个细胞。

具体来说,可以按照以下步骤操作:

收集所需数量的悬浮细胞,并用PBS或其他缓冲液洗涤细胞一次,去除细胞培养基等残留物。

将细胞沉淀后加入足够的裂解液,建议使用含有离子型或非离子型洗涤剂的裂解液,可以增加蛋白质的提取效率和纯度。

振荡或旋转等方式将细胞充分裂解,可以考虑使用震荡器或超声波细胞破碎器等设备。

将裂解后的混合液离心,去除残留细胞碎片等杂质,收集上清液中的蛋白质。

需要注意的是,具体加入裂解液的量还取决于实验要求和细胞类型等因素。为了获得最佳的蛋白质提取效果,可以在实验前进行优化,测试不同的裂解液浓度和裂解时间,并选择最佳的实验条件。

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