怎么样才能去敲除尽量多的 TP53 蛋白

可以先用特异性核酸酶剪切一下再敲除。

选择tp53多个转录本共有序列，sgRNA位置选择基因近5'端，从文章中查找效果显著的sgRNA

既然是做 knockout，那一定是要所有的亚型都不能表达。那么既然如此，就是要敲除掉这些亚型共有的区域，而且越前面越好（如果只敲除尾巴，TP53 合成了半个身子，半个身子的 TP53 说不定也能起作用），另外，也不能敲除掉内含子（说是，如果敲掉了，可能会形成进的剪接，就有新的蛋白出现）

通过CRISPR 技术构建好的 pTYNE 载体与 pCas9/gRNA1 基因敲除载体共转染 293T 细胞。进行细胞 TP53 基因敲除能敲除更多。