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各位实验大神:
小弟近日正在进行percoll提取小鼠肝脏三种细胞的尝试,三种细胞分别为肝细胞、Kupffer细胞和肝星状细胞。经过几次实验,仅一次误打误撞提纯了肝细胞、一次肝星状细胞。未提纯过Kupffer细胞。经过多个资料汇总得知经验后,目前本人使用的是60%percoll纯化肝细胞,一管内50%和25%percoll的间断梯度提纯上清液里的Kupffer细胞和肝星状细胞。然而发现肝细胞和肝星状细胞很容易混合,上清液也很难分出Kupffer细胞和肝星状细胞。摸索调整了多次离心转速均难以奏效。
为了尽快得到稳定纯化的三种肝脏细胞、加快实验进度,也尽量减少伤害为实验付出可怜的小鼠性命,请各位大神不吝赐教具体实施步骤(包括percoll浓度是否正确,离心力多少(因各个离心机参数不一致,最好为x g的数值))参数或指出错误,小弟在此拜谢!
顺便请教一下,湘仪L530离心机加速减速梯度怎么设置?暂未获得方法。
土井挞克树
提取肝脏细胞严格控制灌流速度,小鼠的最佳速度是5ml每分钟,推荐最好用蠕动泵代替手工注射器,灌流过程中保证灌流液的温度。
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