一抗封闭

没有特殊的要求，就是要及时加抗体之后4度过夜

一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度

孵育一抗

A. 先将需要检测的抗体准备好,并决定好它们的稀释度。

B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀释好抗体。注意,如需高比例稀释,

采用梯度稀释。

C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育。 一般采用RT 1小时,可根据抗体量和膜上