Saint-White-Bear
求教一下各位,在文献里看到有巨噬细胞和CD33一抗敷育来让CD33失效做CD33相关功能的验证,问下大家有做过类似的么,这种方法的话对一抗和敷育封闭的条件有什么要求么?麻烦啦
灵枢天问
没有特殊的要求,就是要及时加抗体之后4度过夜
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一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果最佳;孵育时间与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,4度过夜(从冰箱拿出后37度复温45min)。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h,浓度一般有工作液,若是浓缩液还要摸索浓度
毛利小五郎的徒弟
孵育一抗
A. 先将需要检测的抗体准备好,并决定好它们的稀释度。
B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀释好抗体。注意,如需高比例稀释,
采用梯度稀释。
C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育。 一般采用RT 1小时,可根据抗体量和膜上