悬浮细胞甩片做免疫荧光染色

普通显微镜下可以看到的话那可能是共聚焦显微镜使用不熟练导致，共聚焦的Z轴比较精准，先低倍在白光下找到细胞，然后再高倍找，找到细胞后再打开激光观察，注意记录Z轴的数值方便下次快速聚焦

盖玻片厚度的可能性不大，还是爬片贴壁的问题。爬片，一定要注意密度密度！！细胞不能太多，连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少，这样细胞也会被洗掉，拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可，在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上，会导致细胞形态和培养瓶内不一致，可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片，再接种细胞即可；

对于悬浮细胞做免疫荧光，你最好加促贴壁试剂，把细胞贴盖玻片上，然后进行操作比较好。