求助！做EMSA，蛋白与DNA不结合？

dxy_btpk2zd7

2022-07-17

目前是探针做了梯度都自己泳下去了，蛋白浓度的数量级参考了文献，用了两个浓度。

我怀疑是含蛋白的溶液有问题，原本的包含蛋白的缓冲液是50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，300mM imidazole，用NaOH 调到pH 8.0，我想把蛋白换到一个不含咪唑的溶液里，且不让蛋白失活，请问应该配制什么样的PBS缓冲液呢？

天一湖医者

2022-07-19

有帮助

可能是实验过程中破坏了蛋白和核酸之间的互相作用。

Eason老歌迷

2022-07-17

有帮助

盐浓度太高了（磷酸盐 50mM， NaCl, 300mM，另外NaOH调节，整体盐浓度 >350 mM），而且不建议用磷酸盐。建议 30 mM Tris-His, pH 8.0, 50 mM NaCl 试试。

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