怎么才能鉴定质粒有没有被双酶切？

跑胶，用未酶切的质粒、单酶切的做参照，条带大小是否符合你的预期。

做单酶切的对照，如果两个单酶切都切开了，双酶切的产物的大片段比单酶切的小，说明就切开了

首先，你提完的质粒跑电泳应该是三条带，等酶切后跑电泳是一条带了。
如果你连上目的条带，你酶切后的条带大小，应该是质粒大小加目的条带的大小。
如果你做的双酶切，应该是两条带，一条是你目的条带的大小，一条是质粒大小