怎样提高原代乳小鼠心肌细胞的得率？得到更多跳动的心肌细胞？

用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞.倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度.结果心肌细胞形态良好,自发搏动,细胞成活率可达到98%,纯度可达到95%.结论本方法培养的心肌细胞存活率高,纯度高,是一种理想的心肌细胞原代培养方法

最近看了好几篇文章，关于改良乳小鼠心肌原代培养的。你可以试一试两步法，,0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化。当然还有很多种方法，你都可以试一哈

(1)取BATcell的Isolationbuffer按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwaterbath预热。(2)Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1）将新生Mice泡入70%EtoH中约5mins进行消毒；(出生后两天内)2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；3）用PBS洗2~3遍；4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolationbuffer中；37°Cwaterbath中消化30mins5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6）用筛网将消化液过滤至15ml离心管中，离心：200g，5min，弃上清；7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；8）用5ml20%FBS-DMEMmedium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~