原理
神经组织主要由两种神经细胞(神经元)和神经胶质细胞组成。神经元为高度分化的细胞,在组织发生晚期已失掉增殖能力,对生存条件要求高,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或在加入神经生长因子(NGF)和胶质细胞因子时,才能生存,并可能出现一定程度的分化现象,如长出突起等,但却难使之增殖;即使培养胚胎组织情况也是如此。对神经细胞的培养待深入研究。
神经胶质细胞为最易培养成分,它分少突、星形和小胶质三种。神经胶质细胞与神经元有共存关系。少突产生丰富的髓磷质,助于神经元兴奋传导,成熟的少突细胞无增殖能力。星形细胞有多种功能,能调节神经元兴奋时产生的离子,提供神经元营养,并能产生促神经元发展和完成功能活动的细胞因子,在培养中有增殖能力。以上说明神经胶质细胞对神经元的存在和功能活动是十分重要的;也提示阐明神经胶质的功能活动有利于神经元的培养。
神经胶质细胞为最易培养成分,它分少突、星形和小胶质三种。神经胶质细胞与神经元有共存关系。少突产生丰富的髓磷质,助于神经元兴奋传导,成熟的少突细胞无增殖能力。星形细胞有多种功能,能调节神经元兴奋时产生的离子,提供神经元营养,并能产生促神经元发展和完成功能活动的细胞因子,在培养中有增殖能力。以上说明神经胶质细胞对神经元的存在和功能活动是十分重要的;也提示阐明神经胶质的功能活动有利于神经元的培养。
材料与仪器
脑组织
Hanks 胰蛋白酶 血清
纱布 培养瓶 CO2温箱
Hanks 胰蛋白酶 血清
纱布 培养瓶 CO2温箱
步骤
人脑组织可用于神经胶质细胞培养,培养组织来自手术室无菌取脑髓灰质和或白质均可用于培养。
一、程序
2. 为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温直立5~10 分钟后,细胞或细胞团块自然下沉,脂肪等杂物易漂浮于悬液表层,吸除上清,如此反复二三次可获较多的细胞成分;
3. 向末次沉降物中加入适量营养液,通过纱网或纱布滤过,计数细胞并调整好细胞密度,接种入培养瓶或皿中,置5 %CO2温箱中培养;
4. 细胞生长汇合后,可用0.25 %胰蛋白酶消化法做传代处理,加消化液的量以能覆盖细胞层即可,待细胞开始从瓶壁脱落(平均5~10 分钟),加入含血清培养液,吹打制成细胞悬液(以无细胞团块的单细胞悬液为佳)。
二、生长特点
1. 接种后初期,细胞可能出现飘浮不贴壁现象,贴壁过程较慢。
2. 贴壁后在短期内也可能不见细胞分裂现象;细胞适应环境过程较长,然而一旦生长后,即能进入较旺盛的增殖状态。
3. 生长开始常杂有巨噬细胞、成纤维细胞和上皮细胞等,传二、三代后,这些成分即消失,逐渐形成均一的星形胶质细胞,一般形成连接不甚紧密的单层细胞。
一、程序
1. 获取脑组织后,先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分,置入Hanks液中漂洗1~2 次后,置于30~50 倍的Hanks液中;脑组织比较柔软,反复吹打即可制备成细胞悬液;
2. 为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温直立5~10 分钟后,细胞或细胞团块自然下沉,脂肪等杂物易漂浮于悬液表层,吸除上清,如此反复二三次可获较多的细胞成分;
3. 向末次沉降物中加入适量营养液,通过纱网或纱布滤过,计数细胞并调整好细胞密度,接种入培养瓶或皿中,置5 %CO2温箱中培养;
4. 细胞生长汇合后,可用0.25 %胰蛋白酶消化法做传代处理,加消化液的量以能覆盖细胞层即可,待细胞开始从瓶壁脱落(平均5~10 分钟),加入含血清培养液,吹打制成细胞悬液(以无细胞团块的单细胞悬液为佳)。
二、生长特点
1. 接种后初期,细胞可能出现飘浮不贴壁现象,贴壁过程较慢。
2. 贴壁后在短期内也可能不见细胞分裂现象;细胞适应环境过程较长,然而一旦生长后,即能进入较旺盛的增殖状态。
3. 生长开始常杂有巨噬细胞、成纤维细胞和上皮细胞等,传二、三代后,这些成分即消失,逐渐形成均一的星形胶质细胞,一般形成连接不甚紧密的单层细胞。
常见问题
一、初代培养
适用于研究神经元的功能活动和胶质细胞的关系等,在不传代时可培养3~6 个月。神经元能发生一定分化现象,如生长突起,但因无增殖能力,最后衰退死亡;但神经胶质尤以星形细胞能继续生存和分列增殖。
二、传代培养
神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。不仅能获得生长的胶质细胞并可形成能传代的二倍体细胞系。胶质细胞在培养中生长稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,能用Rous病毒和SV-40等诱发转化。
适用于研究神经元的功能活动和胶质细胞的关系等,在不传代时可培养3~6 个月。神经元能发生一定分化现象,如生长突起,但因无增殖能力,最后衰退死亡;但神经胶质尤以星形细胞能继续生存和分列增殖。
二、传代培养
神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。不仅能获得生长的胶质细胞并可形成能传代的二倍体细胞系。胶质细胞在培养中生长稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,能用Rous病毒和SV-40等诱发转化。
来源:丁香实验