巨噬细胞RAW264.7超难养，说好养的多半是极化了都不知道，请教各位从实验仪器到细胞培养，传代，铺板一系列问题？跪谢了

养了将近半年的raw了，也算是有点发言权了。

我养raw用的6cm的皿；传代可不用pbs洗，用细胞刮将细胞轻柔刮下来，轻柔吹打，不用离心，直接传代，传代比例一般是1:3-1:4，这样的话两天传代一次；raw非常容易分化，平时传代时一定要注意手法轻柔，因为机械刺激会导致它分化，分化之后的raw变形，贴壁牢固，不易传代。至于传板子什么的都和一般细胞类似。我一般会6cm皿传两个6孔板，第二天就可以干预了。

一般可以用细胞培养皿🧫。传代可以用细胞刮刀把细胞刮下来，离心，换新培育基，再轻轻吹打散，传代到新细胞皿。铺板的按需要的浓度稀释后，中板即可。

使用带有无菌枪头的移液器吸取脂质体时，建议要在洁净的环境中（比如无菌操作台）进行，避免瓶内脂质体的污染。一般来说培育液都会终止胰酶消化,在实际操作以及能查阅的资料中都说明要移除胰酶后再加入培养液,清除胰酶是防止细胞消化过度影响传代后细胞活性

重点是找到好的血清，千万别用国产的（不是我媚外）实在是国产的血清谁也不知道里面到底含了多少抗生素

正确的传代方法是RAW264.7细胞培养的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。RAW264.7细胞不能用胰酶消化，许多实验室用细胞刮传代，这是一种非常经典好用的方法。普诺赛在RAW264.7细胞培养这十几年里，摸索出一个更不错的方法：吹打传代。吹打传代操作简单，对细胞培养的新手们更友好，也能更好地控制细胞分化率。

传代步骤：

1) 轻拍几下培养皿

2) 用1ml的枪或者巴氏管把细胞吹下来（吹不下来的舍弃）

3) 细胞吹下来后转移到15ml离心管

4) 1200rpm （约250g）离心3min

5) 去上清，用新鲜培养基重悬细胞

6) 按比例接种到新的培养皿中

传代时机：

1) 当细胞密度较低的时候，可能不太好吹下来。

2) 当细胞密度达到80%~90%的时候，最容易吹下。