伊文思蓝定量

伊文思蓝（Evans Blue）是一种用于血管渗漏和组织渗透性研究的染料。以下是一个基本的伊文思蓝定量测定的流程：

1. 样品制备：

• 收集需要测定的样品，如血液或组织样本。

• 如果使用三氯乙酸提取，将样品与三氯乙酸按照适当的比例混合，并离心以沉淀蛋白质。

2. 伊文思蓝染色：

• 取适量的伊文思蓝溶液（一般为0.5%-2%浓度）。

• 将样品与伊文思蓝溶液按照适当的比例混合，使伊文思蓝充分与样品中的蛋白质结合。

• 在适当的温度和时间下进行反应，通常是在37摄氏度下孵育1-2小时。

3. 染色液去除：

• 将样品与伊文思蓝染色液分离，一般通过离心分离。

4. 染色物定量：

• 用适当的溶剂提取染色物。

• 使用分光光度计测量提取物的吸光度。

• 使用标准曲线或浓度计算公式将吸光度转换为伊文思蓝的浓度。

关于使用无水乙醇，它在这个过程中的作用是将伊文思蓝溶解并稀释。无水乙醇可以有效溶解伊文思蓝，使其在溶液中均匀分散。此外，无水乙醇还可以稀释样品中的蛋白质和其他干扰物质，从而更准确地测量伊文思蓝的吸光度。

最后，将浓度从吸光度单位（一般为吸光度单位）转换为微克/克的单位需要知道样品的体积和浓度。通过浓度计算公式，将伊文思蓝的浓度（以吸光度表示）除以样品的体积，然后乘以适当的单位转换系数，将单位转换为微克/克。

伊文思蓝染色步骤：

1. 取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，入100μl Evans Blue Stain轻轻混匀，染色 3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2. 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。

伊文思蓝具体操作步骤

1.组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将组织制成匀浆,1000g离心15min。

3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

4. 1000g离心20～30 min或2000g离心15min。

5. 取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的伊文思蓝含量。