求聚丙烯酰胺的胶银染有什么好办法？

银染色步骤：

1.固定：固定液 冰醋酸： 150ml(10%)

双蒸水：1350ml

把经冷却的胶板置于盛有1.5L的塑料盘中，摇床震荡30min左右。

2.洗胶：把经固定的胶板置于盛有1.5L双蒸水的塑料盘中清洗两次，每次2-4min。

3.染色： 染色液 硝酸银： 1.5g(0.1%)

37%甲醇：2.25ml

加双蒸水至1.5L

把清洗干净的胶板置于盛有染色液的塑料盘中，摇床震荡30min左右。

4.洗胶：把经固定的胶板置于盛有1.5L双蒸水的塑料盘中清洗一次，该步骤动作要迅速，约3s。

5.显色：显色液 碳酸钠： 45g(0.03g/ml)

37%甲醛： 2.25ml(0.15%)

硫代硫酸钠：300ul(10mg/ml)

加双蒸水至1.5L

把清洗干净的胶板置于盛有显色液的塑料盘中显色。显色时间根据条带和背景颜色深浅调整，达到DNA条带清晰的目的。显色液一定要预冷至4-10，否则会使被背景加深。

6.终止显色：把染色完毕的胶板放回盛有固定液的塑料盘中，反应3min。用双蒸水清洗两次(每次2min)。

7.干胶：胶板置于室温自然干燥。

8.条带统计。

注：1.固定时间可以减少，只要指示剂颜色消失即可

2.提高硝酸银浓度(0.2%)，可减少染色时间。

注意事项：PAGE胶电泳，采用银染法显色后，虽然其灵敏度比EB高很多，但是这种方法不利于DNA回收。

可以试试改进的银染方法（整个过程只需要20min左右):

1、 电泳结束后切断电源,从电泳槽中倒出缓冲液,然后取下胶板,将凝胶从玻板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中,用蒸馏水漂洗2次。

2、银染:加入染色液(0.2%的AgNO3、 1%的冰醋酸、 10%的无水乙醇)进行银染,然后用蒸馏水漂洗2次。

3、显影:加入显影液(3%的无水NaOH,每200 mL溶液加1 mL甲醛)进行显色。

4、凝胶摄影:用数码相机对凝胶进行照相。

以下是一些可能导致胶银染结果不明显的常见问题：

1. 蛋白质浓度过低：如果你的样品中的目标蛋白质浓度较低，可能导致胶银染结果不明显。在染色之前，尝试增加加载的样品量或进行浓缩蛋白质，以增加目标蛋白质的浓度。

2. 蛋白质迁移不完全：如果转膜的时间或电流不足以将蛋白质迁移到膜上，那么染色结果可能不明显。确保使用适当的转膜条件，包括正确的电流和转膜时间。

3. 胶银染试剂的质量问题：胶银染试剂的质量也可能会影响染色结果。确保使用新鲜的试剂，并根据制造商的说明正确配制试剂。

4. 染色时间不足：染色时间不足也可能导致胶银染结果不明显。确保你的染色时间足够长，充分发展出目标蛋白质的染色信号。

5. 膜处理不当：膜的处理和固定步骤也可能影响胶银染结果。确保你正确地进行膜的固定和染色步骤，包括适当的洗涤和处理。