求教细胞真菌污染处理方案
melon医生
各位老师同学好，今天发现有一皿H9C2细胞出现了明显的真菌污染（肉眼可见菌落，镜下可间菌丝，培养基颜色无明显异常），
查了下丁香园，也请教了基础实验较丰富的师兄师姐和同学，建议丢掉细胞，酒精擦拭培养箱，并把培养架拿到超净台照紫外（已照做）。
但是我查到真菌是耐紫外，也耐酒精和84消毒液，不耐高温（说60℃ 1小时即可），但培养箱无法调到60℃，想请教大家具体处理方案，感激不尽！
另外，部分代理商推荐细胞房安全卫士（普诺赛），说可以消除真菌孢子、细菌病毒等，不知道大家有没有使用经验？
附污染可能原因：
1. 冻存的细胞本身污染，它是复苏24h后换液，48h又换液，目前是又72h了，长得慢，所以延长了换液间隔
2.操作过程中培养液洒在了皿盖或者侧壁上
3. 房间污染：操作完细胞开了2次中央空调，后用紫外照射房间30min以上。
备注：同批复苏的其他种类细胞长势良好，已部分冻存，目前还有4皿，暂没发现污染现象
3 个回答
loveliufudan
首先，建议立即丢弃污染的细胞，以免污染扩散至其他培养皿。
对于培养箱的清洁和消毒，可以先用70%酒精擦拭培养箱内部，然后放入一个装有70%酒精的容器，关闭培养箱门，让酒精挥发，消毒30分钟左右。紧接着，打开培养箱门通风，待酒精挥发后，再用紫外灯照射30分钟。
对于培养架，已经采取了照紫外的措施，您可以再用70%酒精擦拭一下，消毒效果会更好。
关于培养箱无法调到60°C的问题，您可以考虑使用干燥箱（如有条件）进行高温处理。将培养架、培养皿等放入干燥箱中，设置温度为60°C，加热1小时即可。
您提到的“细胞房安全卫士（普诺赛）”，有些实验室可能使用过并反馈效果不错。您可以根据自己实验室的条件和预算决定是否购买。但是，实验操作规范和良好的实验习惯仍然是预防污染的关键。
关于您提到的污染可能原因：
如果您怀疑冻存的细胞本身有污染，您可以复苏其他批次的细胞，或者从其他实验室借一些做对照实验。另外，您可以加强对冻存细胞的管理，确保冻存条件良好。
操作过程中，确保培养液不会洒在培养皿盖或侧壁上，以免造成污染。实验操作时，尽量在超净台进行，保持操作规范。
关于房间污染，您已经采取了紫外照射的措施。保持实验室的清洁和良好通风，定期进行环境消毒也是很有必要的。
土井挞克树
可使用两性霉素B或者300ug/mL的氟康唑处理
balalaLy
培养箱用84消毒液擦拭然后紫外消毒就可以了。其它耗材高压灭菌，细胞能丢的尽快丢掉。
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