食用真菌的液体培养

1. 一种（斜面菌种，俗称母种。母种斜面移种后称原种）培养

用无菌接种铲薄薄铲下侧耳斜面菌丝 1 块，接种于马铃薯培养基斜面中部，26～28℃ 培养 7 d。 食用菌的细胞分裂仅限于菌丝顶端细胞，若用接种环刮下表面菌苔接种，因切断薄丝，DNA 流失严重，大多生长不好。

2. 二级种（摇瓶种子）培养

将上述一级种用无菌接种铲铲下约 0.5 cm² 的菌块至装有 50 ml 玉米粉蔗糖培养基的 250 ml 三角瓶中，26～28℃ 静止培养 2 d，再置旋转式摇床，同样温度，150～180 r／min，培养 3 d。静止培养，促使铲断菌丝的愈合，有利于繁殖，大规模菌丝生产，一般都进行二级摇瓶神子培养。

若系作为固体栽培的种子，则在菌丝球数量达到最高峰时（3 d 左右），放入 10 颗左右灭菌玻璃珠，适度旋转揺动 5 min、10 min 均质菌丝，将这种均质化的菌丝片断悬液作为接种物（或用匀浆器，均质一定时间）。取 1 ml 涂布在酵母裔麦芽汁琼腊平板上，重复 3 份，置 28℃ 培养 3 d 后计算菌落数作为菌丝断片成活试验。

用摇瓶种子可以直接作固体栽培种，而用均质菌丝悬浮液作栽培种，发育点多、接种效果好。也可以成熟的播瓶种子接种处理好的麦粒，制成液体一麦粒栽培种，细胞年舲一致，老化菌丝少，用作栽培种，则生产时间缩短，污染率低，可増产 5％～25％。

1.3 发酵培养

上述摇瓶种子无杂菌污染即可分别以10％ 接神量接入 3 个玉米粉综合培养基中（50 ml／250 ml 三角瓶），25～28℃ 培养 3～4 d。从第一天起至结束，每天取已知重量的干燥小离心管 3 个，分别重复取样 2.0 ml，4000 r／min 10 min，弃上淸 60～62℃ 24 h 干燥称恒重。

发酵液由稠变稀，菌丝略有自溶即应暂停培养。发酵液经过不同处理，制成备种用途。