丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

杆状病毒表达

相关实验:重组杆状病毒的纯化实验

user-title

小鸭小二郎儿

构建的重组质粒,二次画线后挑取白斑进行菌液PCR ,为啥没有条带啊各位大佬,按理来说不会没有成功的

wx-share
分享

3 个回答

user-title

sswei

有帮助

PCR 的成功与否与模板、引物、DNA 聚合酶及其他反应组分、反应条件这四大要素紧密相关。任一个出问题,就不会出现条带。

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助

增加样本量,可能是含量太低了,达不到检测的最低值

user-title

loveliufudan

有帮助

以下是一些可能的原因:

模板质量:如果从白斑中提取的质粒DNA质量较低,可能会导致PCR反应失败。建议检查DNA的纯度和浓度,并重新提取质粒DNA。

PCR反应条件:反应条件可能需要进一步优化,例如引物浓度、PCR反应体系和温度循环程序等。建议优化PCR反应条件,并使用正常的质粒DNA作为对照进行比较。

引物设计:引物的特异性可能需要进一步检查,确保引物与目标序列匹配。建议使用已验证的引物或尝试设计新的引物。

细菌转化效率:转化效率可能低于预期,导致白斑中没有重组质粒。建议检查细菌转化条件,并优化转化实验。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序