96孔板做病毒滴度怎么处理数据 计算结果啊？小白求大神解答

MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒体积（mL）/细胞个数

在96孔板中铺1×10^4个细胞/孔，培养基定容至100μL/孔；

依据所计算出的病毒体积，逐个孔添加慢病毒，并于感染次日更换新鲜培养基。

a．带荧光标签的慢病毒：观察荧光

感染后72小时后，于荧光显微镜下观察细胞状态和荧光情况，确定细胞状态较好且荧光数较多的孔，对应为较适宜的MOI值。

b． 不带荧光标签的慢病毒：抗性筛选（puromycin/blasticidin等）

查阅相应抗性素在相应细胞株中的筛选浓度，于感染后72小时加入药物，培养3-5天，镜下观察，选取细胞存活率较高且细胞状态较好的孔，对应为较适宜的MOI值。

.病毒滴度计算公式:

距离比例=大于50%的阳性百分比－50/大于50％的阳性百分比－小于50％的阳性百分比

TCID50的对数=大于50％的阳性百分比的最高稀释度对数＋距离比例X稀释度间距的对数

（如果1：10稀释，则稀释度间距的对数为1；如果1：5稀释，则稀释度间距的对数为0.7；如果倍比稀释，则稀释度间距的对数为0.3；如果半对数稀释，则稀释度间距的对数为0.5）根据得到的结果查反对数表就可以了

使用荧光计数和滴度计算：

用荧光显微镜对荧光阳性细胞进行计数。数出最后两个能观察到荧光的孔内的荧光细 胞数，计算3个重复孔内的总数之和并计算出平均数，假设为A（倒数第二个能见荧光 孔的荧光细胞平均数）和B（倒数第一个能见荧光孔的荧光细胞平均数）。 慢病毒病毒滴度计算公式： 病毒滴度(TU/mL) = （A+B×10）×1000/2/A孔病毒量（μL）