脾脏原代培养细胞中提取RNA
科研小废物一枚
取小鼠脾脏细胞（混悬液）铺六孔板培养72小时后，从贴壁细胞中提取RNA。（有加1×红细胞裂解液裂解红细胞）
问题：在脾脏细胞RNA提取过程中，加入等倍体积异丙醇离心后和75%乙醇离心后都有明显沉淀，但RNA浓度极低，只有5-20ng/μL，为啥呀？（叹气）
4 个回答
dxy_ziufs3xw
请问最后怎么解决的呢？我最近也在做，提rna浓度在20-30😭
科研小废物一枚
最后没铺板子做了，直接提，或者你可以换那种大的细胞培养皿铺
loveliufudan
有以下几个可能的解释：
1. 细胞数量限制：提取的脾脏细胞数量可能较少，导致RNA的总量有限。如果您使用的是较小的细胞数（每个小鼠脾脏细胞数目较低），则相应的RNA浓度也会较低。
2. 细胞破碎和核酸蛋白复合物分离：在裂解液处理过程中，可能未能充分破碎细胞或完全分离核酸蛋白复合物，这可能导致RNA的部分损失或降解，从而降低提取的RNA浓度。
3. 沉淀和洗涤步骤问题：添加异丙醇和75%乙醇是为了沉淀和洗涤RNA。如果在沉淀和洗涤过程中未能充分沉淀和洗涤RNA，可能会导致RNA丢失或残留于上清中，从而降低RNA的浓度。
4. 逆转录反应问题：在逆转录过程中，如果逆转录酶的效率较低或反应条件不理想，可能会导致逆转录反应不完全，从而降低产生的cDNA数量，最终影响到测定的RNA浓度。
sswei
因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触致使组织中的 RNA 容易被降解，使RNA提取减少。
土井挞克树
提高脾脏细胞裂解时间吧，沉淀可能是破碎的细胞碎片，不一定含有RNA
科研小废物一枚
我的脾脏贴壁细胞特别难吹打下来，我加了trizol后静置了五分钟后，大概花两个小时吹打了六个六孔板（都是培养的原代脾脏细胞），大概百分之八十都有吹打下来，请问，会有可能是加了trizol这步裂解时间太长了吗?
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